更新更新時(shí)間:2019-06-25
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A) 系統(tǒng)污染、惰性下降
系統(tǒng)惰性不好對(duì)活性組分峰形及響應(yīng)的影響尤為明顯。建議選用惰性?xún)?yōu)異的低流失氣相色譜柱和色譜耗件,如去活的襯管。如果系統(tǒng)已經(jīng)被污染,應(yīng)及時(shí)對(duì)進(jìn)樣口和檢測(cè)器進(jìn)行維護(hù)?;謴?fù)被污染色譜柱的方法主要有:
將進(jìn)樣口端截去 0.5~1 米,根據(jù)樣品來(lái)源做進(jìn)一步的判斷,如果是半揮發(fā)污染物,還可以進(jìn)一步考慮對(duì)色譜柱進(jìn)行老化。
污染嚴(yán)重時(shí)可截去更長(zhǎng)或用溶劑*清洗色譜柱(必需是交聯(lián)鍵合固定相)
B) 色譜柱安裝不正確或系統(tǒng)其他部位存在死體積
毛細(xì)管柱在進(jìn)樣口和檢測(cè)器的安裝位置不當(dāng)將影響峰形,請(qǐng)嚴(yán)格按照儀器的使用說(shuō)明正確安裝色譜柱。其他與毛細(xì)管柱相連接的部位也應(yīng)注意降低死體積。
C) 系統(tǒng)漏氣
需定期檢查系統(tǒng)氣密性、更換進(jìn)樣口備件。使用非純石墨密封圈時(shí),注意安裝后的幾次溫度升降之后追加一次擰緊。
D) 方法條件不佳
對(duì)于低揮發(fā)性樣品,需注意提高進(jìn)樣口和/或檢測(cè)器、色譜柱、傳輸管線等處的溫度,防止冷凝現(xiàn)象。
有些樣品在某些檢測(cè)器的響應(yīng)確實(shí)不高(甚至沒(méi)有響應(yīng)),如果樣品不出峰,又沒(méi)有參考響應(yīng)值,應(yīng)加大進(jìn)樣量確認(rèn)出峰位置,并利用標(biāo)樣考查樣品的響應(yīng)值。
E) 其他可能導(dǎo)致峰拖尾的原因:
1 不分流模式下,分流放空閥開(kāi)啟過(guò)晚(通常應(yīng)在 0.5~1.0 分鐘之間)
2 手動(dòng)進(jìn)樣速度過(guò)慢
3 檢測(cè)器尾吹氣流量不足
4 PLOT 色譜柱樣品過(guò)載
5 組分共流出
6 含磷化合物在 NPD 白色銣珠上易拖尾,建議使用黑色銣珠。
A) 正確的安裝,好的開(kāi)始是成功的一半!
1 區(qū)分進(jìn)樣口端與檢測(cè)器端,鐵標(biāo)簽上的字正對(duì)安裝者。
2 確保進(jìn)樣口的潔凈度,如有污染,請(qǐng)更換襯管和分流平板。
3正確切割KB毛細(xì)管柱
4 安裝之后做好氣相色譜柱配置(EPC 系統(tǒng),輸入色譜柱規(guī)格后,請(qǐng)進(jìn)行柱長(zhǎng)校正)
5對(duì)新色譜柱進(jìn)行適度老化
B) 正確的使用
1 請(qǐng)勿劃傷色譜柱表面的聚酰亞胺涂層,因此不要將色譜柱與尖銳的表面直接接觸。
2 注意色譜柱盒包裝側(cè)面的溫度上下限。
舉例:KB-5MS, 30m×0.25mm×0.25μm,溫度限為-60 o C 至 325 o C/350 o C。三個(gè)溫度從左
到右的含義分別是:
溫度下限:低于此溫度使用可以導(dǎo)致柱效下降,但對(duì)色譜柱沒(méi)有損害。
恒溫溫度上限:恒溫使用色譜柱時(shí),此溫度為******上限。
程序升溫溫度上限:程序升溫使用此色譜柱時(shí),可升至此溫度,但不可超過(guò) 15 分鐘。
1 確保密封無(wú)漏氣 (使用純度高的載氣,新的進(jìn)樣隔墊,規(guī)格合適的密封圈都是必需的)
2 做好樣品前處理,防止將不揮發(fā)的物質(zhì)及對(duì)色譜柱傷害較大的化合物(如:無(wú)機(jī)酸和堿)
引入色譜柱中,如果無(wú)法將這此物質(zhì)在進(jìn)樣前除去,請(qǐng)?jiān)诜治鲋敖颖Wo(hù)柱。
C) 氣相色譜柱正確的保存
1 氣相色譜柱不使用時(shí),請(qǐng)從 GC 上卸下,并用舊的密封隔墊將其兩端封住。下一次使用時(shí),需要把色譜柱兩端修整掉 2-4cm,以確保隔墊碎屑不會(huì)堵塞色譜柱。
2 如果把色譜柱留在加熱的 GC 中,一定要保證始終有載氣通過(guò)氣相色譜柱。
氣相色譜儀啟動(dòng)后不久或氣相色譜柱更換后不久,噪聲是不可避免的,這是正?,F(xiàn)象。噪聲過(guò)大是指比正常的標(biāo)準(zhǔn)高得多的噪聲或某些不正常的突變。
注意:發(fā)現(xiàn)噪聲過(guò)大時(shí),請(qǐng)先檢查氣相色譜儀和積分儀使用的電網(wǎng)電源是否有異常波動(dòng)或突變,特別是在同一電網(wǎng)電源上接有大功率裝置時(shí),更要注意。此外,請(qǐng)檢查儀器的接地是否正確并且良好。
A.改變量程范圍,噪聲的大小還是基本不變時(shí),要考慮是否信號(hào)線的故障、放大器電路板的故障、輸出信號(hào)線的故障、積分儀的故障。
B.將火焰熄滅之后噪聲如果還是很大,要考慮從檢測(cè)器到放大器電路板這一段是否存在問(wèn)題,請(qǐng)進(jìn)行下列項(xiàng)目的檢查:
1).檢查檢測(cè)器的噴嘴、收集極、離子信號(hào)線插座、點(diǎn)火線等部分是否固定可靠,請(qǐng)排除接觸不良的可能。
2).檢查檢測(cè)器是否被污染,如果污染請(qǐng)進(jìn)行清洗。
3).要考慮是極化電壓、放大器電路板、工作電源的故障。
C.將火焰熄滅之后噪聲如果降低或消失,要考慮是否檢測(cè)器本身產(chǎn)生過(guò)大噪聲:
1).檢查是否使用的氣體純度太低,請(qǐng)更換氣體或使用氣體過(guò)濾器去除氣體中的雜質(zhì)。
2).檢查檢測(cè)器是否被污染,如果污染請(qǐng)進(jìn)行清洗。
3).檢查空調(diào)器等冷暖設(shè)備的排風(fēng)是否正對(duì)著氣相色譜儀,請(qǐng)改變風(fēng)向或更換儀器的位置。
D.降低進(jìn)樣口溫度后如果噪聲變小,要考慮是否進(jìn)樣口有污染現(xiàn)象。
E.降低氣相色譜柱溫度后如果噪聲變小,要考慮是否載氣純度不夠或色譜柱的老化不足,請(qǐng)更換載氣或使用氣體過(guò)濾器去除載氣體中的雜質(zhì),并對(duì)色譜柱進(jìn)行老化。
氣相色譜儀(柱)的選擇
F.如果需要更換氣相色譜儀,氣相色譜柱。
1、毛細(xì)管柱載氣流量的選擇
通過(guò)毛細(xì)管柱的載氣流量要根據(jù)毛細(xì)管柱的柱長(zhǎng)、柱徑、膜厚以及被分析物的組成等綜合因素設(shè)定。高流速雖然可以提高分析效率,但有時(shí)可能會(huì)因被測(cè)物與固定相之間交換不充分而降低柱效。因此,在實(shí)際分析中,流速的設(shè)定應(yīng)在滿(mǎn)足分離的前提下適當(dāng)增加,以提高分析效率。對(duì)于氣相色譜-質(zhì)譜儀,還要考慮質(zhì)譜真空泵的抽氣量,氣流速大還會(huì)影響到靈敏度。
某些檢測(cè)器,如電子捕獲檢測(cè)器,僅靠通過(guò)毛細(xì)管色譜柱的載氣流量無(wú)法滿(mǎn)足工作需求,因此,還需要補(bǔ)充加上尾吹氣。另外,有些廠家的儀器采用在毛細(xì)管柱的末端加上尾吹氣的設(shè)計(jì),以減少擴(kuò)散,改善色譜峰形,提高信噪比。
2、毛細(xì)管柱柱溫的選擇
柱溫是影響色譜分離和分析效率的***重要參數(shù),所以要根據(jù)分析目的和被測(cè)物性質(zhì),如:被測(cè)物的沸點(diǎn)、被測(cè)物極性、被測(cè)組分的多少,通過(guò)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到合適的柱溫。交聯(lián)型毛細(xì)管色譜柱相對(duì)而言柱流失比較少,可以在較高溫度下工作。分析中通常采用程序升溫模式,從而提高分離度和柱效。
(1) 初始溫度的選擇
初溫的確定取決于譜圖上***早流出峰的分離度,一般應(yīng)低于樣品中******沸點(diǎn)組分的溫度。
(2) 升溫速率的選擇
升溫速率對(duì)色譜分離度和峰形的影響******,對(duì)于多組分分析,可以設(shè)置多階、不同升溫速率的升溫程序,以得到******的分離效果和峰形。
(3) 終點(diǎn)溫度的選擇
程序升溫***終溫度的確定主要取決于固定相和被測(cè)樣品中******沸點(diǎn)的物質(zhì)。另外,對(duì)于基質(zhì)復(fù)雜的樣品,可以考慮在固定相規(guī)定******溫度下適當(dāng)提高溫度(但接質(zhì)譜******不要這樣做),并且在此溫度下適當(dāng)延長(zhǎng)保持時(shí)間。
3、進(jìn)樣方式的選擇
對(duì)于毛細(xì)管色譜分析有多種進(jìn)樣方式可以選擇。殘留分析應(yīng)選擇不分流進(jìn)樣或柱上進(jìn)樣,純度分析則多選擇分流進(jìn)樣,分流比根據(jù)被測(cè)物含量而定。但分流進(jìn)樣對(duì)定量精度會(huì)有影響,分流比越大定量精度越差。
4、毛細(xì)管柱的選擇
固相萃取裝置是一種被廣泛應(yīng)用且備受歡迎的樣品前處理技術(shù),就是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附,與樣品的基體和干擾化合物分離,然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附,達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。它在傳統(tǒng)的液—液萃取基礎(chǔ)上采用物質(zhì)間相似作用的相似相溶原理并結(jié)合目前廣泛應(yīng)用的液相色譜和氣相色譜固定相基本知識(shí)發(fā)展而來(lái)。
三種固相萃取柱的操作方法介紹:
一、反相萃取柱操作
從極性基體中提取非極性的樣品
1、活化:以3—5毫升甲醇淋洗萃取柱;以3—5毫升去離子水(或緩沖液)淋洗萃取柱并保持萃取柱濕潤(rùn)
2、上樣:以合適的流速使樣品均勻通過(guò)萃取柱
3、清洗:以5毫升適當(dāng)極性的溶劑洗脫吸附樣品的萃取柱(常用的有純水,緩沖液,水/有機(jī)溶劑混合液)
4、洗脫:將被測(cè)樣品,用1—5毫升非極性溶劑分批洗脫至收集容器
二、正相萃取柱操作
從非極性基體中提取極性的樣品
1、活化:3—5毫升非極性溶劑淋洗萃取柱
2、清洗:以5毫升適當(dāng)非極性的溶劑洗脫吸附樣品的萃取柱
3、洗脫:將被測(cè)樣品,用1—5毫升極性溶劑分批洗脫至收集容器
三、離子交換萃取柱
提取帶電荷的樣品
1、活化:以3—5毫升去離子水/或低離子強(qiáng)度的緩沖液淋洗萃取柱
2、上樣:以較低的流速,使樣品均勻通過(guò)萃取柱
3、清洗:5毫升去離子水/或低離子強(qiáng)度的緩沖液淋洗萃取柱
4、洗脫:將被測(cè)樣品,用1—5毫升高離子強(qiáng)度的緩沖液洗脫至收集容器
四、固相萃取柱的選擇
固相萃取柱目錄:
1:石墨化炭及復(fù)合S系列(農(nóng)殘),固相萃取柱
2:聚合物基質(zhì)S系列(HLB-MCX-MAX-WCX-WAX)固相萃取柱
3:硅膠基質(zhì)正相S系列(硅膠-氟硅土-氧化鋁-Diol-PSA-氨基)固相萃取柱
4:硅膠基質(zhì)離子交換S系列(SAX-SCX-PRS)固相萃取柱
5:硅膠基質(zhì)反相S系列(C18-C8-CN)固相萃取柱
6:前處理及分析應(yīng)用(固相萃?。┕滔噍腿≈?/span>
7:C8-SCX-SAX混合S系列(藥物代謝及濫用)固相萃取柱
離子色譜是液相色譜的一種,故又稱(chēng)離子色譜(HPIC)或現(xiàn)代離子色譜,其有別于傳統(tǒng)離子交換色譜柱色譜的主要是樹(shù)脂具有很高的交聯(lián)度和較低的交換容量,進(jìn)樣體積很小,用柱塞泵輸送淋洗液通常對(duì)淋出液進(jìn)行在線自動(dòng)連續(xù)電導(dǎo)檢測(cè)。
離子色譜儀的使用:
1、流動(dòng)相瓶中濾頭要注意始終處于液面以下,防止將溶液吸干。
2、啟動(dòng)泵前觀察從流動(dòng)相瓶到泵之間的管路中是否有氣泡,如果有則應(yīng)將其排除。
排除方法如下:先將與泵相連的塑料流路接頭擰下來(lái),用洗耳球吸滿(mǎn)去離子水,從與泵段相連的流路管中注入,將流路管中的氣泡排除干凈。然后再將流動(dòng)相瓶(一般為去離子水瓶)抬高,再將流路接頭與泵連接好。啟動(dòng)泵,打開(kāi)泵內(nèi)排氣閥選鈕,將泵內(nèi)氣泡排除干凈,一般觀察為流出液比較均勻,再將泵排氣閥擰緊。(注意:此項(xiàng)操作時(shí),整個(gè)流路是與色譜柱斷開(kāi)的)
3、用去離子水或流動(dòng)相清洗整個(gè)流路時(shí),可以采用大流量清洗(一般可將流量設(shè)置為2.0ml/min,但不能再太大)以縮短清洗時(shí)間,但在通流動(dòng)相接色譜柱時(shí)需要將流量調(diào)整為色譜柱使用流量條件。
操作如下:先將泵停止,再按動(dòng)正號(hào)或負(fù)號(hào),將光標(biāo)調(diào)整至流量位置,按下確認(rèn)鍵,再通過(guò)調(diào)節(jié)正負(fù)號(hào)將流量調(diào)節(jié)至色譜柱使用條件后,再按確認(rèn)鍵。此時(shí)需要等待5s后再啟動(dòng)泵開(kāi)關(guān)。接色譜柱時(shí)注意先將接頭在色譜柱前端抵上2-5s,將色譜柱前端氣泡排除后再將接頭擰緊。待色譜柱下端流出溶液后,在將色譜柱下端接頭擰上。(注意:接頭不能擰的太緊,防止將管路卡的太緊而造成系統(tǒng)壓力增大,擰的程度以不漏液為宜)
4、使用陰離子色譜柱檢測(cè),通流動(dòng)相時(shí)注意將電流旋鈕打開(kāi),調(diào)節(jié)至90-100mA,使用完畢后要將電流旋鈕關(guān)閉。
5、進(jìn)樣時(shí)閥的扳動(dòng)要注意,不能太快,以免損傷閥體;也不能太慢,以免造成樣品流失。在進(jìn)樣過(guò)程中,要嚴(yán)格按清洗程序操作,以減小前次樣品殘留對(duì)本次檢測(cè)的影響。
隨著人們對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量意識(shí)的日益加強(qiáng),化學(xué)分析儀器的自動(dòng)化程度不斷提高,化驗(yàn)室中分析天平的使用也越來(lái)越廣泛了。電子分析天平雖操作簡(jiǎn)單,但日常維護(hù)也是*的。日常要注意以下幾點(diǎn):
1、將天平置于穩(wěn)定的工作臺(tái)上,避免振動(dòng)、氣流及陽(yáng)光照射,防止腐蝕性氣體的侵蝕。高精度的電子天平要滿(mǎn)足說(shuō)明書(shū)要求的溫度和濕度波動(dòng)的條件,才能達(dá)到規(guī)定的稱(chēng)量準(zhǔn)確度要求。
2、稱(chēng)量易揮發(fā)和具有腐蝕性的物品時(shí),要盛放在密閉的容器中,以免腐蝕和損壞電子天平。
3、秤盤(pán)和外殼可以用軟布輕輕擦凈,切不可用強(qiáng)溶劑擦洗。
4、防止超載,注意被稱(chēng)物體的質(zhì)量應(yīng)在天平的******載量以?xún)?nèi),電子天平大多都有保護(hù)裝置,但超載可能會(huì)損壞天平!
5、較長(zhǎng)時(shí)間不使用的天平,應(yīng)每隔一定時(shí)間通一次電,以保證電子元器件的干燥。電子天平搬動(dòng)和運(yùn)輸時(shí)應(yīng)將秤盤(pán)和托盤(pán)取下。
6、稱(chēng)量室不要放置干燥劑,因?yàn)楦稍飫┑奈头潘纬闪瞬煌较虻臍饬?,引起空氣浮力的變化,?dǎo)致稱(chēng)量不穩(wěn)定。
7、經(jīng)常對(duì)電子天平進(jìn)行自?;蚨ㄆ谕庑?,保證其處于******狀態(tài)。
由于分光光度計(jì)是一種常用的實(shí)驗(yàn)室分析儀器,所以無(wú)論是從款式上還是價(jià)格上五花八門(mén),一般往往給初購(gòu)者造成眼花繚亂、令人無(wú)所適從的感覺(jué);價(jià)格因素一般是購(gòu)買(mǎi)者首先考慮的問(wèn)題,盡管分光光度計(jì)種類(lèi)繁多,但不外乎:簡(jiǎn)易型、中檔型和型三大類(lèi):
(1)簡(jiǎn)易型儀器及其特點(diǎn):
結(jié) 構(gòu):這種類(lèi)型的儀器多為單光束型,即只有一束光照射到樣品室內(nèi);光源一般僅有鎢燈;樣品支架一般為推拉式四聯(lián)池架;波長(zhǎng)選擇多為手動(dòng)查找,重復(fù)性差;狹縫為一個(gè)固定寬度模式;光學(xué)性能指標(biāo)較低;檢測(cè)器多為光敏二極管;顯示器多為機(jī)械表頭或數(shù)碼管顯示器,數(shù)據(jù)處理器一般沒(méi)有。此類(lèi)儀器生產(chǎn)以國(guó)內(nèi)廠家居多。測(cè)量模式:多為定點(diǎn)(固定波長(zhǎng))吸光度或透過(guò)率測(cè)量方式,基本不能進(jìn)行波長(zhǎng)掃描測(cè)量。適應(yīng)范圍:小型實(shí)驗(yàn)室及示范教學(xué),分析樣品相對(duì)簡(jiǎn)單,測(cè)試結(jié)果精度要求不高。
(2)中檔型儀器及其特點(diǎn):
結(jié) 構(gòu):此類(lèi)儀器多為雙光束型或準(zhǔn)雙光束型,但也有單光束儀器型;光源有鎢燈和氘燈;樣品池支架為兩個(gè)固定式,分別是樣品通道和參比通道;波長(zhǎng)按照設(shè)定模式自動(dòng)查找或掃描;狹縫多數(shù)仍為2nm固定寬度模式,也有1.5nm狹縫寬度的;檢測(cè)器多數(shù)是硅光二極管,但也有少數(shù)用光電倍增管的;光學(xué)性能相對(duì)較高,其中光柵的技術(shù)指標(biāo)尤為重要,******的光柵為凹面型,為此無(wú)論在分辨率還是在雜散光方面指標(biāo)要優(yōu)于簡(jiǎn)易型儀器;顯示器為液晶式或連接電腦,數(shù)據(jù)處理可由儀器自身具有的或外接計(jì)算機(jī)處理。并有一定的測(cè)量附件。測(cè)量模式:透過(guò)率、吸光度、濃度直讀、單光束;單點(diǎn)及掃描均可。適應(yīng)范圍:此類(lèi)儀器基本可滿(mǎn)足大多實(shí)驗(yàn)室分析需要。
(3)型儀器及特點(diǎn):
結(jié)構(gòu):除了中檔儀器的特點(diǎn)外,主要是光學(xué)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)和制造工藝水平更高了,比如使用了大尺寸的凹面光柵,并且光柵刻槽數(shù)大于1800條/mm;波長(zhǎng)檢測(cè)范圍有的儀器在近紅外區(qū)已經(jīng)超過(guò)1100nm,可達(dá)到2600nm;狹縫均為連續(xù)可調(diào)型,以適應(yīng)高分辨率的需要,波長(zhǎng)掃描速度的檔位也增加了,檢測(cè)器均使用高靈敏度的光電倍增管和紅外檢測(cè)器;數(shù)據(jù)處理目前基本是電腦來(lái)執(zhí)行;衡量一臺(tái)儀器的另外一個(gè)指標(biāo)是看此儀器是否具有豐富的附屬測(cè)量器件,如偏振附件、積分球附件、反射附件、自動(dòng)進(jìn)樣器附件、色度分析軟件、薄膜附件等等。測(cè)量模式:透過(guò)率、吸光度、濃度直讀、反射方式、能量方式,單點(diǎn)、掃描均可;適應(yīng)范圍:科研、光學(xué)產(chǎn)品的檢測(cè)、生化樣品檢測(cè)、復(fù)雜樣品檢測(cè)等。不但可以測(cè)液態(tài)樣品,也可測(cè)固態(tài)樣品。
色譜分析過(guò)程中,緩沖液是*的,因?yàn)橐盟鼇?lái)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值,緩沖鹽使用不當(dāng),后果可是吃不了兜著走。比如說(shuō),色譜柱壓升高、柱效下降、保留時(shí)間異常等等不良影響、
1)柱壓升高;
原因、緩沖鹽使用不當(dāng)導(dǎo)致緩沖鹽析出,堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙,阻礙流動(dòng)相傳質(zhì),引起柱壓升高。
2)相同化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化;
原因、如果沒(méi)有沖洗干凈就進(jìn)行進(jìn)樣,色譜柱內(nèi)含有的鹽會(huì)使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化.
3)色譜柱柱效下降;
原因、
1)有些緩沖鹽會(huì)滲入到鍵合相的深處,損害硅膠基體,導(dǎo)致色譜柱鍵合相流失,柱床變松,柱效下降;
2)凝結(jié)在鍵合相表面,使C18碳鏈難以舒展,對(duì)物質(zhì)的保留能力下降,導(dǎo)致柱效下降。因此用過(guò)緩沖鹽后需要對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗,水中緩沖鹽濃度較大時(shí)應(yīng)特別引起注意。
使用前和使用后的處理:
1、使用前的處理:
在使用緩沖鹽作流動(dòng)相之前需要用不含緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱,直至基線平穩(wěn)。原則上,用于沖洗的流動(dòng)相與分析時(shí)所用的流動(dòng)相含水的比例相同(或含水更多),不同的只是用于沖洗用的流動(dòng)相中不含緩沖鹽。理由、緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí))流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí),如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對(duì)較小,不先沖洗掉,接下來(lái)做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中如果有機(jī)溶劑含量大,而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí),緩沖鹽將會(huì)在色譜柱柱體上析出,沉積下來(lái),這將可能導(dǎo)致上述對(duì)色譜柱的損害.
2、使用后的處理:
用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相(與分析用流動(dòng)相******的區(qū)別是,用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽)進(jìn)行沖洗約30min,直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來(lái)很長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)不使用,要長(zhǎng)期保存,則需再加上一步,即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍,直至基線平穩(wěn)。
用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相(與分析用流動(dòng)相******的區(qū)別是,用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽)進(jìn)行沖洗約30min,直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來(lái)很長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)不使用,要長(zhǎng)期保存,則需再加上一步,即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍,直至基線平穩(wěn).緩沖液可以提供離子平衡的反離子,并使流動(dòng)相保持一定的離子強(qiáng)度和ph值,減少拖尾。
3.使用注意事項(xiàng):
1、避免使用鹽酸鹽,鹽酸鹽對(duì)鋼質(zhì)有腐蝕作用。
2、緩沖液******要現(xiàn)配現(xiàn)用,往往緩沖液是良好的菌類(lèi)培養(yǎng)液,隔天或放置長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)有很多怪現(xiàn)象發(fā)生。
3、實(shí)驗(yàn)后不可用有機(jī)溶劑直接過(guò)度,有機(jī)溶劑會(huì)處使鹽類(lèi)析出,造成液路或色譜柱堵塞,可用95、5的水甲醇沖洗。
4、使用緩沖液要及時(shí)掌握ph范圍,做到胸中有數(shù)。
5、清洗液路和柱子時(shí),有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗。
6、長(zhǎng)時(shí)間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無(wú)析出,若有白色鹽類(lèi)析出,可考慮一定周期用10%硝酸沖洗一下液路(拆下柱子,走30ml,再用5倍水沖洗)可以避免液路的堵塞。
7、選擇緩沖液要用可靠的試劑,避免不純的鹽類(lèi)造成不必要的麻煩。
如果流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例很高是不能用來(lái)沖洗緩沖鹽的,是洗不出來(lái)的。通常賽分C18色譜柱先用5%~10%的甲醇沖洗,是可以把緩沖鹽沖洗出來(lái)的,然后用純的有機(jī)溶劑來(lái)保護(hù)柱子。******的方法是使用與流動(dòng)相相同濃度不含鹽的流動(dòng)相進(jìn)行清洗。但就是速度慢一些。用水是為了快速替換,一般在15分鐘以?xún)?nèi)******,且用0.8的流速較好.如果用純水沖,容易造成鍵合的碳鏈的流失,******用5%~10%甲醇水溶液沖.可以用純水代替流動(dòng)相中的緩沖液,有機(jī)相不變。這樣沖洗柱子比較穩(wěn)妥。
8、實(shí)驗(yàn)室耗材色譜柱的選擇
1 如果需要購(gòu)買(mǎi)色譜柱,或者是查看更多關(guān)于色譜柱技術(shù)方面的問(wèn)題。
液相色譜儀是屬于易學(xué)難用的儀器,特別講究“正確使用”和經(jīng)驗(yàn)。液相工作者接觸***多的是流動(dòng)相,也就是流動(dòng)相,是造成液相色譜各種問(wèn)題的***主要源頭。做好液相色譜儀的正確操作,能極大的降低故障率,減少維修和停機(jī)成本。下面就來(lái)說(shuō)一說(shuō)在液相色譜儀使用中的注意事項(xiàng)。
一、泵是液相色譜儀的心臟。處于良好工作狀態(tài)的泵,基線平穩(wěn),保留時(shí)間重現(xiàn)性好,梯度洗脫時(shí)壓力變化緩慢而且平穩(wěn)。泵的使用要注意:
1.選擇的溶劑和試劑,在進(jìn)入儀器前用 0.45um MS過(guò)濾膜過(guò)濾,并進(jìn)行脫氣處理。
2.泵開(kāi)始使用時(shí),一定要用合適的流動(dòng)相*清洗干凈。
3.定期檢查并更換在線過(guò)濾片及有關(guān)的墊圈,經(jīng)常清洗進(jìn)液處的微孔濾頭。
4.改變流動(dòng)相時(shí),應(yīng)注意沉淀的產(chǎn)生,以防止泵堵塞。
二、液相色譜法對(duì)液相色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。PS(推薦使用賽分色譜柱)所以說(shuō)色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中,要注意下列問(wèn)題,以維護(hù)色譜柱。
1.避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況。因此在安裝時(shí)要輕拿輕放。
2.色譜柱PH使用范圍是2.0-9.0。當(dāng)使用PH值范圍邊界時(shí),分析結(jié)束立即用與所使用流動(dòng)相互溶的溶劑*清洗置換流動(dòng)相。
3.每次分析結(jié)束后,都要對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗。每次工作完后,******用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí),使用完后應(yīng)用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。
4.若長(zhǎng)時(shí)間不用該色譜柱,要沖洗好后,用純甲醇或乙腈封存。
三、檢測(cè)器是液相色譜的大腦,起著至關(guān)重要的作用。如何更好地發(fā)現(xiàn)和排除檢測(cè)器故障是液相色譜使用的*技能。
1、檢測(cè)器是液相色譜儀器的數(shù)據(jù)收集部分,由很多的電子和光學(xué)元件組成。禁止拆卸更動(dòng)儀器內(nèi)部元件防止損壞或影響準(zhǔn)確度。
2、儀器內(nèi)部的流通池是流動(dòng)相流過(guò)的元件,樣品的干凈程度和微生物的生長(zhǎng)都可能污染流通池,導(dǎo)致無(wú)法檢測(cè)或檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn),所以在使用了一段時(shí)間以后要先用水沖洗流通池和管路再換有機(jī)溶劑沖洗。
3、當(dāng)儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)出現(xiàn)明顯波動(dòng),基線噪音變大時(shí)要沖洗儀器管路,沖洗后如果還是沒(méi)有改善就應(yīng)該檢測(cè)氘燈能量,如果能量不足就因更換新的氘燈。
4、儀器在每次使用完了以后都要用水和一定濃度的有機(jī)溶劑沖洗管路,保證下次使用時(shí)管路和系統(tǒng)的清潔。
固相萃取實(shí)質(zhì)上是一種液相色譜分離,其主要分離模式也與液相色譜相同,可分為正相(吸附劑極性大于洗脫液極性),反相(吸附劑極性小于洗脫液極性),離子交換和吸附。固相萃取所用的吸附劑也與液相色譜常用的固定相相同,只是在粒度上有所區(qū)別。
正相固相萃取的特點(diǎn)
固相萃取是一種用途廣泛而且越來(lái)越受歡迎的樣品前處理技術(shù)。S是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附,與樣品的基體和干擾化合物分離,然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附,達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。因其具有安全、回收率高,重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)便、快速、應(yīng)用范圍廣、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。
固相萃取方法的選擇
固相萃取技術(shù)的分離模式有多種,具體使用哪種方法,主要取決于待處理樣品的相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)及樣品的性質(zhì)。
1.選擇固相萃取應(yīng)考慮的問(wèn)題:
(1)待測(cè)物的化學(xué)性質(zhì):功能基團(tuán)、能否離子化,是水溶性還是脂溶性。
(2)基質(zhì)的性質(zhì):pH值、離子強(qiáng)度、是水還是有機(jī)溶劑。
(3)類(lèi)似干擾物的性質(zhì)。
(4)待測(cè)物在樣品中的濃度。
(5)分析的檢測(cè)限及靈敏度。
(6)待測(cè)物是否需要富集、純化。
2.固定相的選擇(根據(jù)相似相溶原則來(lái)選擇固定相):
S的固定相是樣品分離、純化的關(guān)鍵,由于固定相關(guān)系到S的重復(fù)性、回收率、靈敏度、特異性,因此S的吸附劑一直是人們關(guān)注的熱點(diǎn)。自S發(fā)明以來(lái),聚合樹(shù)脂的樣品污染一直令人苦惱,因此,提供了C18鍵合硅膠制成一次性小柱,具有很高的可靠性和穩(wěn)定性,已廣泛應(yīng)用于臨床生化檢驗(yàn)。凡可用于HPLC的吸附劑均可用于S,包括近年來(lái)針對(duì)藥物濫用檢測(cè)的“designerphase”。吸附劑的選擇既要考慮樣品各組分與固定相的親和力、待測(cè)物與洗脫劑的作用力,還要考慮其通用性。
就目前化學(xué)鍵合相而言,非極性鍵合相有C1、C2、C4、C6、C8、環(huán)己烷基、苯基、二苯基、C18等;極性和弱離子交換相有:氰基、二醇基、氨基、伯胺/仲胺基、丁酸基;強(qiáng)離子交換相有:丙磺酸基、苯磺酸基、季銨基等;吸附樹(shù)脂有:XAD-2、GDX、X-5。具有選擇專(zhuān)屬性的苯基磺酸可用于分離共平面連位羥基結(jié)構(gòu)分子。對(duì)于生物樣品,大多溶解在水性物質(zhì)里,待測(cè)物被離子化,用離子交換萃取分離極性很強(qiáng)的物質(zhì),非極性或弱極性分析物用R-P提取,正相萃取用于提取有機(jī)溶劑中的極性物質(zhì)。吸附劑的用量必須保證從樣品中有效吸附所有的待測(cè)物,不保留基質(zhì)成分,增加吸附劑的量可增大吸附能力,但同時(shí)也增大洗脫體積,使待測(cè)物稀釋?zhuān)o干燥和定量帶來(lái)困難。因此在達(dá)到有效吸附的前提下用***小量的吸附劑。
什么是細(xì)胞培養(yǎng)皿
細(xì)胞培養(yǎng)皿是一種用于微生物或細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室器皿,由一個(gè)平面圓盤(pán)狀的底和一個(gè)蓋組成,一般用玻璃或塑料制成。它***初由在德國(guó)生物學(xué)家羅伯特·科赫手下工作的細(xì)菌學(xué)家朱利斯·理查德·佩特里(Julius Richard Petri,1852-1921)于1887年設(shè)計(jì),故又稱(chēng)為“佩特里皿”。培養(yǎng)皿質(zhì)地脆弱、易碎,故在清洗及拿放時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎、輕拿輕放。使用完畢的培養(yǎng)皿******及時(shí)清洗干凈,存放在安全、固定的位置,防止損壞、摔壞。
細(xì)胞培養(yǎng)皿的清洗步驟
一般經(jīng)過(guò)浸泡、刷洗、浸酸和清洗四個(gè)步驟。
1.浸泡:新的或用過(guò)的玻璃器皿要先用清水浸泡,軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來(lái)水簡(jiǎn)單刷洗,然后用5%鹽酸浸泡過(guò)夜;用過(guò)的玻璃器皿往往附有大量蛋白質(zhì)和油脂,干涸后不易刷洗掉,故用后應(yīng)立即浸入清水中備刷洗。
2.刷洗:將浸泡后的玻璃器皿放到洗滌劑水中,用軟毛刷反復(fù)刷洗。不要留死角,并防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾干,備浸酸。
3.浸酸:浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中,又稱(chēng)酸液,通過(guò)酸液的強(qiáng)氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質(zhì)。浸酸不應(yīng)少于六小時(shí),一般過(guò)夜或更長(zhǎng)。放取器皿要小心。
4.沖洗:刷洗和浸酸后的器皿都必須用水充分沖洗,浸酸后器皿是否沖洗的干凈,直接影響到細(xì)胞培養(yǎng)的成敗。手工洗滌浸酸后的器皿,每件器皿至少要反復(fù)“注水-倒空”15次以上,***后用重蒸水浸洗2-3次,晾干或烘干后包裝備用。
液相色譜儀峰分叉怎么回事?
造成這種情況的原因一般是色譜柱被污染,或柱頭填料塌陷導(dǎo)致的。
對(duì)于******種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。
對(duì)于第二種情況,擰開(kāi)柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復(fù)幾次,直至裝滿(mǎn)填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。
如何排除液相色譜儀氣泡溢出故障?
流動(dòng)相內(nèi)產(chǎn)生都無(wú)法清除不斷產(chǎn)生的氣泡,主要是因?yàn)檫^(guò)濾器長(zhǎng)期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過(guò)濾器內(nèi)部由于霉菌的生長(zhǎng)繁殖,形成菌團(tuán),阻塞了過(guò)濾器,緩沖液難以流暢地通過(guò)過(guò)濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過(guò)濾器進(jìn)入流動(dòng)相。
過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小時(shí),輕輕震蕩幾次,再將過(guò)濾器用純水清洗幾次,打開(kāi)泄壓閥,打開(kāi)purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過(guò)濾器冒出,繼續(xù)將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒(méi)有氣泡不斷從過(guò)濾器中冒出,說(shuō)明過(guò)濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞,流動(dòng)相可以流暢地通過(guò)過(guò)濾器。打開(kāi)泄壓閥,打開(kāi)泵,流速調(diào)至1.0~3.0ml/min,純水沖洗過(guò)濾器1小時(shí)左右。即可將過(guò)濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時(shí)即可。
自檢時(shí)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)“鎢燈能量低”的錯(cuò)誤?
一般來(lái)說(shuō),原因是系統(tǒng)中有擋光物,光路偏離,鎢燈電源系統(tǒng)或鎢燈燈泡已壞。這時(shí)首先要檢查光度室是否有擋光物;打開(kāi)檢測(cè)器光源室蓋,檢查氘燈是否點(diǎn)亮;如果氘燈不亮,則關(guān)機(jī),更換新氘燈,換時(shí),需注意型號(hào);檢查氘燈保險(xiǎn)絲,看是否松動(dòng)、氧化、燒斷;如果故障,應(yīng)立即更換;再開(kāi)機(jī)重新自檢;若仍出現(xiàn)上述故障,則重新安裝軟件后再進(jìn)行自檢。
出現(xiàn)壓力波動(dòng)大,流量不穩(wěn)定?
造成這種情況的原因是系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動(dòng)相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲(chǔ)液器瓶底,避免吸入空氣,流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
液相色譜儀峰面積重復(fù)性不好?
主要原因可能有進(jìn)樣閥漏液、加樣針不到位或液量不足。針對(duì)******種情況,處理時(shí)應(yīng)對(duì)更換進(jìn)樣閥墊圈;對(duì)于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài),以保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。日常工作中,液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要,如要注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中,儲(chǔ)液器內(nèi)的溶液如長(zhǎng)時(shí)間未用應(yīng)清洗儲(chǔ)液器并更換溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無(wú)機(jī)鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì),*溶解,盡量減少對(duì)色譜柱的污染,以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,同時(shí)避免注射過(guò)濃的樣品溶液,以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞;色譜柱作好標(biāo)記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
液相色譜柱壓升高?
造成柱壓升高的原因很多。一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了異常的占位性物體,造成流體阻力加大所引起的。例如,緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi),或樣品污染沉積。針對(duì)******種情況,處理時(shí)應(yīng)先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速?zèng)_洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對(duì)于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上
關(guān)于標(biāo)示:
1.液相色譜柱的流向不能改變
在我們常規(guī)思維中,色譜柱上標(biāo)示的流向是不可改變的,每次使用都要遵循。可是,大家有沒(méi)有想過(guò)這個(gè)方向的作用是什么呢?為什么要標(biāo)示一個(gè)使用方向呢?
其實(shí)色譜柱前后端的填料及填裝工藝都是一樣的,標(biāo)示方向的目的就是讓我們?cè)谑褂弥杏涀×鲃?dòng)相從哪個(gè)方向流入色譜柱,那么這個(gè)流入段就是***先污染端。這樣就為我們?nèi)蘸缶S護(hù)或再生色譜柱做了準(zhǔn)備,而我們需要遵循這個(gè)規(guī)定應(yīng)該在色譜柱開(kāi)始做樣后。
我曾將已經(jīng)污染過(guò)的色譜柱反方向來(lái)使用,如果保留時(shí)間不是很長(zhǎng),而色譜柱足夠長(zhǎng),還是能使用一段時(shí)間的。
2.不去看說(shuō)明書(shū),直接就上機(jī)使用
色譜柱內(nèi)部保存著什么溶劑一定要看清楚,因此色譜柱的說(shuō)明書(shū)一定要看清楚,當(dāng)然也包括說(shuō)明書(shū)上建議的維護(hù)保養(yǎng)規(guī)定,對(duì)我們都非常的有用。對(duì)于反相柱來(lái)說(shuō),溶劑基本就是乙腈或甲醇。但正相柱就不同了,因?yàn)檎嘀丝梢赃m用正相系統(tǒng),也可以適用反相系統(tǒng),因此一定要看清楚,對(duì)于你的方法來(lái)說(shuō)是否需要置換色譜柱內(nèi)部保存溶劑。
關(guān)于沖洗:
3.用純水沖洗色譜柱才能把緩沖液沖洗干凈
使用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱對(duì)內(nèi)部填料的損傷是******的,尤其是純水,除非你的色譜柱是耐水的。沖洗色譜柱******的方法是用流動(dòng)相比例的水系和有機(jī)系來(lái)沖洗。如果你認(rèn)為流動(dòng)相比例無(wú)法把色譜柱沖洗干凈或者此比例中有機(jī)系占有比例過(guò)大,你可以使用內(nèi)含10%左右的純水來(lái)沖洗。
關(guān)于保存:
4.保存在乙腈或甲醇中的新色譜柱可以直接使用
理論上液相色譜柱不同于氣相色譜柱需要活化,但是由于液相色譜柱內(nèi)部保存的有機(jī)系具有揮發(fā)性,因此在使用前還是應(yīng)該用小流速的和色譜柱內(nèi)部相同的溶劑沖洗一定的時(shí)間。可以是0.5ml/min,120min,但******咨詢(xún)廠家,根據(jù)色譜柱參數(shù)設(shè)定。
5.色譜柱應(yīng)該保存在純乙腈或甲醇中
根據(jù)第4條,色譜柱內(nèi)部保存液具有揮發(fā)性,因此為了減少其揮發(fā)速度,可以添加5%-10%的水,這樣的話可以在一定程度上減少一些有機(jī)系的揮發(fā)。如果再增加一個(gè)保險(xiǎn),我們可以在堵緊堵頭后,再用封口膜封起來(lái)。同樣道理,色譜柱一段時(shí)間不用后,也應(yīng)該按照第4條,進(jìn)行小流速的沖洗色譜柱。
關(guān)于再生:
6.色譜柱污染后把篩板卸下來(lái)超聲清洗
對(duì)于色譜柱的污染,*的就是篩板,因此我們***常用的做法就是把柱頭卸下來(lái),把篩板拿去超聲清洗。但是我們?cè)诓鹦哆^(guò)程中對(duì)色譜柱前端填料的損害遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于污染照成的傷害,因?yàn)槲覀儾皇菍?zhuān)業(yè)的。因此建議這一步能不做就不做。
7.自己填裝色譜柱
和第6條相同,這一步做法幾乎可以把此色譜柱判死刑了,我們的填裝工具有什么呢?就是手工的,其填裝壓力遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于工廠內(nèi)原始的填裝壓力。那么我們填裝的結(jié)果會(huì)是個(gè)什么樣也就很明顯了。
在我看來(lái),自己填裝也就是練練手,熟悉一下這個(gè)過(guò)程,要把色譜柱維修好的可能性幾乎為零。
8.用異丙醇沖洗再生后,柱子效果更差了
這種情況我自己就遇到過(guò),還好那根柱子本來(lái)就打算報(bào)廢了,因此也沒(méi)有照成多少損失。但是這是什么原因呢?其實(shí)很簡(jiǎn)單,就是在我反向沖洗前沒(méi)有把管路中的污染物沖洗干凈就直接接了柱子。所以說(shuō),方法是沒(méi)有錯(cuò)的,色譜柱受污染時(shí),我們應(yīng)該先想到儀器也污染了!
9.色譜柱的選擇
如果需要購(gòu)買(mǎi)色譜柱,液相色譜柱,反相柱,正相柱,離子交換柱,等等,或者是需要查看更多關(guān)于液相色譜柱維護(hù)知識(shí)。
MS-Clean?凍存管是由透明高分子材料聚丙烯制成的,經(jīng)特殊工藝制造,使其能耐受超低溫,并保證無(wú)泄露,管體可有清晰準(zhǔn)確得刻度和手寫(xiě)的空白標(biāo)簽,方便記錄,凍存管適用于細(xì)胞和組織的長(zhǎng)期超低溫冷藏。
MS-Clean?凍存管產(chǎn)品特征:
管壁均勻,透明,帶可立裙邊
管提印有準(zhǔn)確的刻度和可寫(xiě)入空白標(biāo)簽區(qū),方便實(shí)驗(yàn)過(guò)程的記錄
精密螺旋蓋,確保液體不外泄,并有效防止液氮的入侵
耐溫范圍:-80。C~121。C
大儲(chǔ)液量為量人刻度的80%
Y射線消毒滅菌
MS-Clean?凍存管產(chǎn)品用途:
冷凍儲(chǔ)藏細(xì)胞,標(biāo)本,溶液:臨床診斷,生物技術(shù)。
藥學(xué)和化學(xué),環(huán)境檢測(cè),食品檢測(cè)。
貨號(hào)
描述
包裝(只/包)
包裝(只/箱)
MS-Clean?凍存管
LBFT18S
凍存管1.8ml,自立式,滅菌
500
11000
LBFT50S
凍存管5.0ml,自立式,滅菌
200
4400
氣相色譜儀無(wú)論在工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程還是日常生活中的使用都得到廣泛應(yīng)用,為達(dá)到使用者正確操作和保養(yǎng),以下關(guān)于***新氣相色譜簡(jiǎn)略的使用方法和說(shuō)明。
1、對(duì)色譜儀分析室的要求
?。?)分析室周?chē)坏糜袕?qiáng)磁場(chǎng),易燃及強(qiáng)腐蝕性氣體。
?。?)室內(nèi)環(huán)境溫度應(yīng)在5~35度范圍內(nèi),濕度小于等于85%(相對(duì)濕度),且室內(nèi)應(yīng)保持空氣流通。有條件的廠******安裝空調(diào)。
?。?)基本具備好3000x800x600 (長(zhǎng)X寬X高) (mm)的能承受整套儀器,便于操作的工作平臺(tái)。平臺(tái)不能緊靠墻,應(yīng)離墻0.5~1.0米,便于接線及檢修用。
(4)為防止電壓波動(dòng)造成檢測(cè)的干擾應(yīng)裝備單獨(dú)容量在10KVA左右的動(dòng)力線路電源。
2、氣源準(zhǔn)備及凈化
?。?)氣源準(zhǔn)備,事先準(zhǔn)備好需用氣體的高壓鋼瓶(一般大中城市均可購(gòu)到),裝某一種氣體的鋼瓶只能裝這種氣體,每個(gè)鋼瓶的顏色代表一種氣體,不能互換。一般用高純氮?dú)?,高純氫氣,無(wú)油空氣這三種氣體,每種氣體******準(zhǔn)備兩個(gè)鋼瓶,以調(diào)換備用。有的廠使用氮?dú)獍l(fā)生器、氫氣發(fā)生器和空氣壓縮機(jī)也可,但空壓機(jī)必須無(wú)油。凡鋼瓶氣壓下降到1~2Mpa時(shí),應(yīng)更換氣瓶。一般廠家使用使用以上氣體99.99%即可,如氣相色譜儀配備電子捕獲檢測(cè)器******使用鋼瓶高純氣源,純度在99.999%以上。
(2)氣源凈化為了出去各種氣體中可能含有的水分,灰分和有機(jī)氣體成分,在氣體進(jìn)入儀器之前應(yīng)先經(jīng)過(guò)嚴(yán)格凈化處理?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)的氣體發(fā)生器具有較高的發(fā)展技術(shù),一般配置分子篩或活性炭過(guò)濾凈化裝置,基本可以滿(mǎn)足氣相色譜儀要求。若使用鋼瓶高純氣體,則需要進(jìn)行凈化過(guò)濾后使用。對(duì)一些的色譜儀附有凈化器,且內(nèi)已填有分子篩,活性炭,硅膠,基本可滿(mǎn)足要求。
3、氣相色譜儀成套性檢查及安放
儀器開(kāi)箱后,按資料袋內(nèi)附件清單,進(jìn)行逐項(xiàng)清點(diǎn),并將易損零件的備件予以妥善保存。然后按照儀器的使用說(shuō)明書(shū)上要求,將其放置于工作平臺(tái)上,并對(duì)著接線圖和各插頭,插座將儀器各部分連接起來(lái),***后連接色譜工作站。
4、色譜儀氣路連接和氣路氣密性檢查
對(duì)于氣相色譜儀氣路鏈接一般由色譜儀生產(chǎn)廠家工程技術(shù)人員進(jìn)行,在無(wú)法達(dá)到滿(mǎn)足的情況下應(yīng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書(shū)中要求在專(zhuān)業(yè)人員指導(dǎo)下安裝連接。
氣密性檢查是一項(xiàng)十分重要的工作,若氣路有漏,不僅直接導(dǎo)致儀器工作不穩(wěn)定或靈敏度下降,而且還有發(fā)生泄漏的危險(xiǎn),特別是氫氣更應(yīng)該加以重視。氣相色譜儀氣密檢查一般是檢查載氣流路,其重點(diǎn)是管路接頭處,對(duì)于氫氣和空氣流路也要做相應(yīng)的檢查。
液相色譜儀作為一種分離技術(shù)和方法,目前已經(jīng)發(fā)展到一個(gè)全新的階段。高精度的輸液泵,應(yīng)用廣泛的色譜分離柱,低噪音、高靈敏度的各種檢測(cè)器和功能強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)的出現(xiàn),都推動(dòng)了液相色譜技術(shù)的迅猛發(fā)展。液相色譜儀正以它分辨率高、分析速度快和應(yīng)用廣泛的優(yōu)點(diǎn)倍受儀器分析工作者的青睞,廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品檢測(cè)等領(lǐng)域。
應(yīng)用HPLC技術(shù)在血藥濃度、生物胺、核苷酸、蛋白質(zhì)濃度測(cè)定等實(shí)際工作中,積累了許多的方法和經(jīng)驗(yàn),在這里與大家交流,希望能對(duì)同行們有所幫助和借鑒,共同促進(jìn)液相色譜分析技術(shù)的發(fā)展。
液相色譜儀使用過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題分析
(一)液相色譜柱柱壓?jiǎn)栴}
液相色譜柱壓過(guò)高,導(dǎo)致這種情況的直接原因可能是液相色譜柱或進(jìn)樣器流動(dòng)不暢通。出現(xiàn)這種情況的根本原因可能是流動(dòng)相抽濾不干凈,存有雜質(zhì),從而堆積在色譜柱或過(guò)濾器中,這時(shí)只要重新配置一遍流動(dòng)相。解決“堵”的方法就是檢查色譜分離柱,確定其流動(dòng)是否暢通,具體操作是在泵工作的情況下將色譜柱的出口處擰開(kāi),看看是否有流動(dòng)相流出,同時(shí)可以調(diào)節(jié)流速,觀察流動(dòng)相流出的流量,進(jìn)而判斷色譜柱是否堵了。還有一些原因,比如:流動(dòng)相的流速過(guò)大(一般為1.0ml/min)、流動(dòng)相的成分不符合標(biāo)準(zhǔn)(沒(méi)有使用HPLC級(jí)別的試劑或者沒(méi)有超聲*)等。這些按照藥典調(diào)整成正確的設(shè)置即可。如果懷疑是在線過(guò)濾器堵了可以關(guān)閉排液閥,斷開(kāi)出口管路,設(shè)定流速為1ml/min,如壓力>3kgf/cm2,則可能堵塞,可以考慮將其置于5%稀硝酸,超聲波清洗一段時(shí)間。***后******在檢測(cè)驗(yàn)樣品的時(shí)候加一個(gè)保護(hù)柱。有時(shí)候也會(huì)柱壓過(guò)低,發(fā)生這個(gè)原因主要是連接不牢固,導(dǎo)致漏液,擰緊即可。更換流動(dòng)相時(shí)沒(méi)有進(jìn)行脫氣,導(dǎo)致儀器里面進(jìn)入空氣,一般的解決方法就是卸下超聲清洗,然后進(jìn)行脫氣。
?。ǘ┗€漂移
在液相色譜儀啟動(dòng)之前,通常先啟動(dòng)半個(gè)小時(shí)后再進(jìn)行操作,這樣做是避免基線漂移。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因很多,其一是色譜柱溫差變化大,需要控制柱溫,用色譜純,也可多抽濾幾次,除去醇溶性流動(dòng)相外的其他流動(dòng)相要勤更換,做到現(xiàn)配現(xiàn)用,以免滋生微生物,堵塞進(jìn)樣通道,造成基線不穩(wěn)定,影響出峰。第三個(gè)原因是流路本身長(zhǎng)期進(jìn)樣沒(méi)有時(shí)間保養(yǎng)積淀的雜質(zhì)。解決方法是用洗脫劑沖洗樣品流動(dòng)的通道,對(duì)于反相色譜系統(tǒng)的流動(dòng)相******甲醇-水系統(tǒng),按照梯度洗脫的方法沖洗掉系統(tǒng)和色譜柱中的雜質(zhì),以免影響樣品的質(zhì)量。必要時(shí)可以用異丙醇。第四個(gè)可能性就是由于紫外燈的使用壽命到了,不能再繼續(xù)工作,解決方法是換紫外燈。***后是樣品本身性質(zhì)的影響,對(duì)于流動(dòng)相的影響較大,解決方法就是用保護(hù)柱檢測(cè)樣品,以免出現(xiàn)問(wèn)題。
離子色譜儀可廣泛應(yīng)用于環(huán)境連續(xù)檢測(cè)、生產(chǎn)過(guò)程連續(xù)檢測(cè)等領(lǐng)域,該產(chǎn)品針對(duì)離子色譜法的在線檢測(cè)問(wèn)題,進(jìn)行了離子色譜法的在線檢測(cè)方法及檢測(cè)工藝、色譜數(shù)據(jù)的在線自動(dòng)處理、產(chǎn)品的檢測(cè)能力及檢測(cè)精度等方面的研究,技術(shù)屬集成創(chuàng)新,其技術(shù)創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在:
1、設(shè)計(jì)了離子色譜法的在線檢測(cè)流程,并采用嵌入式系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)了三通道并行全自動(dòng)檢測(cè)。
2、采用電導(dǎo)法的在線檢測(cè)工藝及數(shù)據(jù)自動(dòng)處理技術(shù),可同時(shí)自動(dòng)檢測(cè)陰離子F-、Cl-、NO2-、PO43-、Br-、NO3-、SO42-和陽(yáng)離子Li、Na、NH4、K、Ca2、Mg2。3、創(chuàng)新性地提出了流動(dòng)伏安檢測(cè)方法,實(shí)現(xiàn)了重金屬離子Cu2、Zn2、Pb2、Cd2的在線檢測(cè)。
離子色譜柱的維護(hù):
1、進(jìn)入色譜柱的樣品,均需要對(duì)其進(jìn)行前處理。樣品中固體懸浮物、有機(jī)物和重金屬是影響色譜柱柱效的三大因素。
固體懸浮物的消除:使用0.45或0.22微米孔徑的微孔濾膜將樣品過(guò)濾即可。
有機(jī)物:固態(tài)樣品,其各檢測(cè)組份對(duì)高溫仍比較穩(wěn)定的,可以采用高溫灰化-淋洗液或去離子水浸取法將有機(jī),離子色譜儀直接IC檢測(cè)。
液態(tài)樣品,可以采用22%雙氧水微波消解1.5h除去有機(jī)物后調(diào)節(jié)PH至中性,直接IC進(jìn)樣檢測(cè)。(注意溶液濃度之間的換算)
重金屬:可以將樣品流經(jīng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂除去重金屬后直接IC進(jìn)樣。
2、組份高含量樣品影響離子色譜柱柱效。
高Cl樣品的處理:將樣品通過(guò)Ag處理柱將Cl-除去后進(jìn)樣或稀釋后進(jìn)樣分析。
高SO42樣品的處理:將樣品通過(guò)Bs處理柱將SO42-除去后進(jìn)樣或稀釋后進(jìn)樣分析。
3、實(shí)驗(yàn)操作完畢,離子色譜柱用淋洗液密封保存。
離子色譜是液相色譜的一種,故又稱(chēng)離子色譜(HPIC)或現(xiàn)代離子色譜,其有別于傳統(tǒng)離子交換色譜柱色譜的主要是樹(shù)脂具有很高的交聯(lián)度和較低的交換容量,進(jìn)樣體積很小,用柱塞泵輸送淋洗液通常對(duì)淋出液進(jìn)行在線自動(dòng)連續(xù)電導(dǎo)檢測(cè)。離子色譜法是液相色譜法中分離分析溶液中離子組分的方法。離子色譜中使用的固定相是離子交換樹(shù)脂。離子交換樹(shù)脂上分布有固定的帶電荷的基團(tuán)和能游動(dòng)的配位離子。
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中經(jīng)常遇到的情況:
新的氣相色譜柱,直接上分析條件來(lái)分析樣品,發(fā)現(xiàn)分離情況不穩(wěn)定。
新的氣相色譜柱,使用中發(fā)現(xiàn)壓力突然升高。
新的氣相色譜柱,發(fā)現(xiàn)分離度、保留時(shí)間發(fā)生了變化。
氣相色譜柱使用不頻繁,一開(kāi)始分析樣品效果比較好,但是,在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)柱效下降快、峰形異常的情況。
氣相色譜峰形異常,基線不穩(wěn)。
當(dāng)發(fā)生以上情況,請(qǐng)仔細(xì)檢查,是否有某個(gè)操作疏忽了?
1)測(cè)試柱性能
通常情況下,我們建議用戶(hù)在拿到氣相色譜柱后,******件事情就是在一臺(tái)性能完好的儀器系統(tǒng)上,按照廠家說(shuō)明書(shū)對(duì)氣相色譜柱進(jìn)行柱效測(cè)試。其實(shí),對(duì)于一個(gè)合格的色譜分析工作者來(lái)說(shuō),拿到一根新色譜柱,要開(kāi)始一個(gè)課題之前,都會(huì)這樣做,目的有二:一、了解氣相色譜柱之前的情況并判斷色譜柱是否正常。二、將檢測(cè)結(jié)果小心保存,當(dāng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常時(shí),在檢測(cè)柱效進(jìn)行對(duì)比,來(lái)進(jìn)一步排查原因。
2)當(dāng)反相使用高濃度緩沖鹽時(shí),注意過(guò)渡
在使用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑時(shí),一定要注意應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出,造成系統(tǒng)堵塞。另外,在發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力升高異常時(shí),要仔細(xì)檢查,段段排除包括保護(hù)柱、混合器、管路或者流通池等。氣相色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)
3)當(dāng)更換氣相色譜柱時(shí),原來(lái)的實(shí)驗(yàn)情況發(fā)生變化.
首先,如果之前開(kāi)發(fā)方法時(shí)色譜柱已經(jīng)做過(guò)別的樣品,那么之前的樣品或使用的流動(dòng)相對(duì)這個(gè)樣品分析可能有干擾,只能重新找條件。建議:開(kāi)發(fā)方法時(shí)使用新的氣相色譜柱。(其次,如果是更換了品牌發(fā)生這樣的情況,可能是由于不同品牌的鍵合技術(shù)不同,造成了選擇性的細(xì)微差異 ,需要調(diào)整條件,并再次確定出峰順序(有些樣品的洗脫順序會(huì)改變)。
再次,如果是更換了同品牌型號(hào)的新的氣相色譜柱發(fā)生這種情況,請(qǐng)檢查之前分離時(shí)目標(biāo)與雜質(zhì)的分離度是否符合要求(Rs大于1.5),如果一開(kāi)始只是勉強(qiáng)分開(kāi)(Rs小于1.5),那只能說(shuō)明方法沒(méi)有優(yōu)化好,需要再次進(jìn)行優(yōu)化。色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)
4)樣品及前處理
樣品要盡可能清潔,可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱(S)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理,要使用保護(hù)柱。流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要使用色譜純,配流動(dòng)相的水******是超純水或雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好,尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外,裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
5)氣相色譜柱基線問(wèn)題
通常情況,基線問(wèn)題是由于系統(tǒng)或者流動(dòng)相引起的,和色譜柱關(guān)系不大。
可能導(dǎo)致的原因:
(1)泵頭進(jìn)氣泡
(2)系統(tǒng)污染
(3)流通池漏液
(4)流動(dòng)相使用的某成分易揮發(fā)不穩(wěn)定(檢測(cè)波長(zhǎng)不合適)
(5)檢測(cè)波長(zhǎng)低,水的質(zhì)量不好等等。
6)KB氣相色譜柱沖洗保養(yǎng)
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